WB，蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)又稱免疫印跡(immunoblotting)，是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。通過抗原抗體反應(yīng)對目標(biāo)蛋白的表達進行半定量檢測，還可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后續(xù)分析。WB作為一種方便可靠的研究工具，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面，將與質(zhì)譜和蛋白質(zhì)芯片等技術(shù)一起在蛋白質(zhì)組時代發(fā)揮重要作用。
目前科研人的 WB 現(xiàn)狀就是干貨都懂，實驗狀況卻頻出。辛辛苦苦花時間制備的細胞卻遇到提取液檢測不到目的蛋白、目的蛋白信號弱 、轉(zhuǎn)膜效率低 、顯色或曝光后無條帶 、Western blot背景高且不均勻、非特異性條帶、條帶拖尾或變形等常見的問題。眾所周知，有效的樣品制備是影響 WB 實驗可重復(fù)性的重要因素。貴州醫(yī)科大學(xué)分子重點實驗室就使用上海凈信冷凍研磨儀制備了人體胃癌細胞樣品提取蛋白做WB實驗。
實驗樣品：人體胃癌細胞；
實驗器材：冷凍研磨儀JXFSTPRP-CLN、研磨管、氧化鋯珠若干；
實驗步驟：
1.細胞沉淀，加緩沖液，提取液，離心重懸；
2.加入氧化鋯珠，與細胞沉淀物的比例1:1；
3.設(shè)置研磨參數(shù)，啟動。
實驗效果圖：
研磨前（未加研磨珠-加研磨珠-研磨后)
附：實驗儀器圖片凈信冷凍研磨儀JXFSTPRP-CLN
上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀是一種快速、高效、制冷的研磨系
統(tǒng)。它能在非常短的時間內(nèi)將土壤、植物和動物的組織/器官、細菌、酵母、真
菌、孢子、古生物標(biāo)本等樣品完成研磨、粉碎、混合機細胞破壁。廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)藥、生化、環(huán)境、地質(zhì)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、質(zhì)檢、材料等領(lǐng)域。
滬公網(wǎng)安備31011702889640號